Proteinlerin Yapısını Belirleyen Yöntemler

Bu video dersi, proteinlerin saflaştırılması, karakterizasyonu ve üç boyutlu yapılarının aydınlatılmasında kullanılan modern biyokimyasal analiz yöntemlerini ele almaktadır. Ders kapsamında proteinlerin iyonizasyon durumunu değiştiren pH oynamaları, polar grupların dehidrasyonuna dayanan salting in ve salting out (tuzla çöktürme) prensipleri ve ağır metal iyonlarıyla (cıva, kadmiyum) alkali ortamda gerçekleştirilen çöktürme reaksiyonları incelenmektedir. Proteinleri boyutlarına göre ayıran membran bazlı diyaliz tekniği açıklanmaktadır. Proteinlerin moleküler ağırlıklarına göre ayrıştırılmasını sağlayan ancak üç boyutlu yapı hakkında bilgi vermeyen SDS-PAGE (SDS-poliakrilamid jel elektroforezi) yöntemi ve protein spesifik tayin sağlayan Western blot tekniği aktarılmaktadır. Son olarak, proteinlerin biyolojik aktivite kazandığı üç boyutlu (tersiyer) yapılarının atomik düzeyde çözümlenmesinde kullanılan X-ışını kristalografisi, karmaşık NMR (nükleer manyetik rezonans) spektroskopisi ve proteinlerin kütle/yük oranlarını hassas şekilde ölçen kütle spektrometresi (MS) ile izoelektrik nokta tayini sağlayan izoelektrik odaklama yöntemleri çözümlenmektedir.